专硕3班-石群锋-2018ZD026 国家自然科学基金 申请书 （2 0 1 8版） 资助类别： 面上项目 亚类说明： 附注说明： 项目名称： 补阳还五汤对百草枯诱导肺纤维化中转化生长因子 β1/Smad3 通路的调控机制研究 申 请 人： 电 话： 石群锋 18408257676 依托单位： 成都中医药大学 通讯地址： 成都市十二桥路37号 邮政编码： 610075 单位电话： 61800000 电子邮箱： 457470903@qq.com 申报日期： 2019年03月01日 国家自然科学基金委员会 专硕3班-石群锋-2018ZD026 基本信息 姓名 申 请 人 信 息 年月 2 男 学位 硕士 职称 教授 电话 18408257676 电子邮箱 457470903@qq.com 传真 123-3124234 国别或地区 中国 工作单位 每年工作时间 （月） 汉 8 成都市十二桥路37号 中医药防治呼吸与老年病的研究 名称 成都中医药大学 联系人 XXXX 电子邮箱 XXXXXXXX 网站地址 http:// www.cdutcm.edu.c n 信息 电话 民族 成都中医药大学 主要研究领域 单位 1978090 性别 个人通讯地址 依托 出生 石群锋 XXXXXX 单位名称 合作 研究 单位 信息 项目名称 补阳还五汤对百草枯诱导肺纤维化中转化生长因子 β1/Smad3 通 路的调控机制研究 英文名称 项目 资助类别 基本 附注说明 信息 申请代码 面上项目 亚类说明 H0110：肺间质性疾病 H0111：急性肺损伤 基地类别 研究期限 2019年01月–2021年12月 申请经费 40.0000万元 中文关键词 英文关键词 研究方向：应用基础研究 百草枯，肺纤维化，转化生长因子β1/Smad3通路 Paraquat, pulmonary fibrosis, transforming growth factor beta 1/Smad3 pathway 专硕3班-石群锋-2018ZD026 专硕3班-石群锋-2018ZD026 中 百 草 枯 （ Paraquat ， PQ ） 化 学 名 为 1 ， 1'- 二 甲 基 4 ， 4'- 二 联 吡 啶 ， 分 子 式 ： 文 CH3 （ C5H4N ） 2CH3Cl2 ， 分 子 量 ： 257.2 ， 自 1962 年 开 始 作 为 除 草 剂 被 广 泛 使 摘 要 用。PQ 对人畜的急性毒性作用很强，且无有效解毒剂，中毒事件经常发生，病死率 居高不下。PQ 中毒后肺纤维化过程中，TGF-β1/Smad3 的表达水平和功能状态会发生 改变，亦存在明显的 EndoMT 现象，但这些细胞和转导因子与 EndoMT 的相关性及它 们在 PQ 导致肺纤维化过程中的具体生物学机制均尚未明了。PQ 致肺纤维化是基于直 接毒性作用还是由免疫炎症反应诱导所形成 [1]。祝春青 的研究表明已有成熟的注射 PQ 肺纤维化模型方案，一次性腹腔注射百草枯可制备小鼠肺纤维化模型 ,40 和 50 mg/kg 为较合适的造模剂量[2]。补阳换物汤作为活血化瘀的代表方剂，多项研究表明 可延缓肺纤维化的进程，并改善肺功能[3]。本研究拟采用逆转录-聚合酶链反应(RTPCR) 法检测 TGF-β1m Ｒ NA，Smad3 m Ｒ NA 的表达。同时采用病理切片行 HE 染色 和 Masson 染色，光镜下观察病理组织学变化并摄片，参照 Szapiel［4］等方法评价各 组大鼠肺组织肺泡炎程度及肺纤维化程度。并设想在以下几方面深入研究：1、扩大 样本量，确证其抗炎作用；2、延长观察时间，重点观察后期的抗纤维化作用；3、观 察其对成纤维细胞的作用及其机制。国内外目前未见同类报道。 参考文献: [1] 陆远强,姜久昆.转化生长因子 β1/Smad3 通路和百草枯中毒所致上皮-间充质 转变[J]. 中华危重症医学杂志(电子版),2017,10(3):145-148. [2]祝春青,陈冬波,王喆,等.腹腔注射百草枯构建小鼠肺纤维化模型[J].生物技术通 讯,2012,23(4):563-566. [3]杨晗,王飞,王全林,等.补阳还五汤对肺纤维化大鼠肺组织 TGF-β1/Smad3 表达 的影响[J].中国实验方剂学杂志,2013,19(24):240-244. [4] Szapiel S V，Elson Na，Fulmer J D，et al．Bleomycin induced interstitial pulmonary disease in the nude，athymic mouse［J］．Am Rev Respir Dis，1979，120: 893. Paraquat (PQ) is chemically known as 1,1'-dimethyl 4,4'-bipyridine, the molecular formula: CH3 (C5H4N) 2CH3Cl2, molecular weight: 257.2, since 1962 as a herbicide has been widely used. The acute toxicity of PQ to human and animal is very strong, and there is no effective antidote, poisoning events often occur, the mortality rate is high. In the process of pulmonary fibrosis after PQ intoxication, the expression level and functional status of TGF-beta 1/Smad3 will change, and there is also obvious EndoMT phenomenon. However, the correlation between these cells and transduction factors and EndoMT, and their 专硕3班-石群锋-2018ZD026 specific biological mechanism in the process of pulmonary fibrosis induced by PQ are still unclear. PQ induced pulmonary fibrosis is based on direct toxicity or [1] induced by immune inflammatory response. Zhu Chunqing's research shows that there is a mature model of pulmonary fibrosis by injection of PQ. Paraquat can be injected intraperitoneally once to establish pulmonary fibrosis model in mice. As a representative prescription of promoting blood circulation and removing blood stasis, Buyang Changwu Decoction can delay the process of pulmonary fibrosis and improve pulmonary function. In this study, reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to detect the expression of TGF-beta 1 mRNA and Smad3 mRNA. At the same time, HE staining and Mason staining were used for pathological sections, histopathological changes were observed and photographed under light microscope, and the degree of alveolitis and pulmonary fibrosis in lung tissues of rats in each group were evaluated by Szapiel [4]. And envisaged in the following areas: 1, expand the sample size to confirm its anti-inflammatory effect; 2, prolong the observation time, focusing on the late anti-fibrosis effect; 3, observe its effect on fibroblasts and its mechanism. No similar reports have been reported at home and abroad. Reference: [1] Lu Yuanqiang, Jiang Jiukun. Transforming growth factor beta 1/Smads pathway and epithelial-mesenchymal transition induced by paraquat poisoning [J].Chinese Journal of Critical Care Medicine (electronic edition), 2017, 10 (3): 145-148. [2] Zhu Chunqing, Chen Dongbo, Wang Zhe, et al. Pulmonary fibrosis model of mice was established by intraperitoneal injection of paraquat [J].Biotechnology Communication, 2012, 23 (4): 563-566. [3] Yang Pi, Wang F